L'agar est un polymère utilisé pour faire pousser des bactéries. L'agar est d'abord fourni sous forme de poudre et, lorsqu'il est dissous dans de l'eau bouillante et refroidi, se solidifie en une surface ferme pour la croissance bactérienne. Il existe de nombreux types d'agar qui peuvent être utilisés pour faire pousser vos bactéries d'intérêt, selon l'espèce et vos besoins de recherche. La gélose nutritive est populaire parce qu'elle peut faire pousser une variété de types de bactéries et de champignons, et contient de nombreux nutriments nécessaires à la croissance bactérienne robuste.
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Composants de la gélose nutritive
La gélose nutritive contient 0,5% de peptone, qui est un digestat enzymatique de protéines animales. Peptone est la principale source d'azote organique pour les bactéries en croissance. L'agar nutritif contient également 0,3% d'extrait de bœuf, qui contient des substances hydrosolubles favorisant la croissance bactérienne, telles que les vitamines, les glucides, les composés azotés organiques et les sels. Le dernier composant de la gélose nutritive est 1,5% d'agar, qui est l'agent de solidification.
Comment faire de la gélose nutritive
Dissoudre les composants énumérés précédemment dans le volume d'eau désiré. Pour préparer 1 litre d'agar nutritif, ajouter 5 grammes de peptone, 3 grammes d'extrait de boeuf et 15 grammes d'agar et s'assurer que le volume final de ce mélange est de 1 litre en ajoutant de l'eau distillée. Chauffer ce mélange en remuant pour dissoudre complètement tous les composants. Autoclave le mélange dissous à 121 degrés Celsius pendant 15 minutes sur le cycle du liquide.
Comment verser les plaques d'agar nutritif
Une fois l'agar nutritif passé à l'autoclave, laissez-le refroidir sans le solidifier. Ajouter des antibiotiques à ce stade si désiré. Enlever les paupières et répartir le nombre approprié de boîtes de Pétri sur une surface stérile. En général, 1 litre d'agar va verser environ 50 grandes boîtes de Petri - 100 millimètres de diamètre - ou 100 petites boîtes de Pétri - 60 millimètres de diamètre. Allumez une flamme à proximité pour garder la zone autour des plaques stériles. Lors de l'ouverture de la bouteille d'agar, passer l'ouverture à travers la flamme afin de le stériliser. Verser l'agar nutritif dans chaque plaque et laisser des plaques sur la surface stérile jusqu'à ce que l'agar s'est solidifié. Replacez le couvercle de chaque boîte de Pétri et rangez les plaques dans un réfrigérateur.
Recommandations pour les plaques de coulage et de stockage
Remplissez chaque assiette d'une moitié à deux tiers. Essayez d'éliminer toutes les bulles d'air, car cela rendra difficile la propagation des bactéries sur la plaque une fois solidifié. Les bulles peuvent être sauté en utilisant la flamme. Conserver les plaques d'agar à l'envers dans le réfrigérateur. Cela empêchera la condensation sur le couvercle de la boîte de Pétri de goutter sur l'agar solidifié. Si vous stockez les plaques à long terme, vérifiez la croissance bactérienne ou le séchage avant de les utiliser.Les plaques contenant des antibiotiques doivent être utilisées dans les deux semaines suivant la préparation.
